渦旋混合器對小鼠宿醉頭痛指標的分析

中國酒文化源遠流長，酒在當今社會的各種交際活 動、社交場合更是不可或缺。但近年來研究顯示，國內(nèi)外急 性酒精中毒發(fā)病率均呈上升趨勢，考慮其龐大群體，并且 容易成為多種急癥的誘發(fā)因素，故應予以重視。急性酒精 中毒是指在短時間內(nèi)攝入大量酒精或含酒精飲料后出現(xiàn) 的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂狀態(tài)，嚴重程度與飲酒速度、飲 酒量、血液酒精濃度及個體耐受性等有關，通常伴有頭痛、 頭暈和胃部不適等延續(xù)效應。

同品牌不同勾調(diào)工藝的48°濃香型白酒（編號分別為 ①號、②號），主要理化成分見表1，由四川省綿陽市豐谷酒 業(yè)有限公司提供。

Balb/c小鼠（雄性，日齡（42～48 d），SPF級）：北京維通 利華實驗動物有限技術公司（生產(chǎn)許可證號：SCXK（京） 2016-0011）。獨立通氣籠盒（individually ventilated cages， IVC）室飼養(yǎng)，環(huán)境溫度20～22 ℃，相對濕度60%～70%，由 四川大學華西公共衛(wèi)生學院實驗動物中心提供（使用許可 證號：SYXK（川）2018-011）。

7890B氣相色譜儀、7697A頂空進樣器：美國Agilent公 司；ECTM-WAX毛細管色譜柱（30 m× 0.53 mm×1.2 μm）：美 國Alltech公司；HeraeusTM FrescoTM 21微量離心機、Multiskan Go全波長酶標儀：美國Thermo Scientific公司；749540-0000 手持式勻漿器：美國Kimble公司；γ放射免疫計數(shù)器：安徽 中科中佳科學儀器有限公司；手動連續(xù)分液器：美國Gilson 公司；TS-1脫色搖床、XW-80A渦旋混合器：海門市其林貝爾儀器制造有限公司；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進醫(yī)療器械廠；V型槽：自制。‘

160只Balb/c小鼠適應性飼養(yǎng)后，按體質量進行分層隨 機分組，分為樣①組、樣②組、酒精對照組和空白對照組， 劑量設置見表2。

1.3.2 翻正反射實驗

禁食不禁水12 h，不同組別小鼠稱體質量后，分別按相 應劑量進行灌胃。參考CRABBE J C等方法，將小鼠背部 置于V型槽中呈仰位，30 s內(nèi)未能翻轉身體，即翻正反射 消失，記錄醉酒時間（min）；60 s內(nèi)能連續(xù)2次翻轉身體，即 翻正反射恢復，記為醒酒時間（min）；并計算醉酒率（%）。

當小鼠翻正反射恢復時，立即抓取固定使其眼球突出 充血，用彎頭眼科鑷迅速鉗取眼球，使血液流入抗凝離心 管中，顛倒混勻后4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取上清， -20 ℃冰箱保存?zhèn)錅y。不同的抗凝劑適用于不同的指標測 定，加入100 μL肝素鈉溶液的抗凝管用于乙醇、PGE2、HIS 含量測定；加入100 μL 1% EDTA、100 μL抑肽酶的抗凝管 用于ET、SP、MEK、CGRP含量測定。

血漿乙醇濃度測定：標本平衡至室溫后，取200 μL待 測標本加入頂空玻璃中，再加入2 mL超純水，蓋緊瓶蓋后 放于頂空進樣裝置中進行汽化平衡，自動進樣1 mL，氣相 色譜法檢測。色譜條件：ECTM-WAX毛細管色譜柱（30 m× 0.53 mm×1.2 μm）；分流進樣，分流比10∶1；載氣：N（純度 2 99.999%），流速25 cm/s；氫火焰離子化檢測器：250 ℃；進 樣口溫度：200 ℃；程序升溫：40 ℃保留5 min，以20 ℃/min 升至200 ℃，保留7 min；頂空氣化條件：平衡時間30 min，加 熱溫度70 ℃，傳輸線溫度90 ℃，進樣針溫度70 ℃。

急性酒精中毒是指一次性過量飲酒所致的急性中毒， 常伴有頭痛、頭暈和胃部不適等延續(xù)效應。研究表明，當 乙醇暴露劑量超過3.5 g/kg，絕大多數(shù)小鼠均會出現(xiàn)翻正反 射消失的現(xiàn)象，故根據(jù)前期預實驗，本研究采用11 mL/kg 體質量（約4.2 g/kg）的單次灌胃劑量進行急性酒精中毒 模型建立。飲酒后，乙醇主要在胃腸道被吸收，約90%～98%的 乙醇通過肝臟進行代謝，代謝速率與攝入量、酶活性等相 關。飲酒后，乙醇主要在胃腸道被吸收，約90%～98%的 乙醇通過肝臟進行代謝，代謝速率與攝入量、酶活性等相 關。CGRP是血管周圍神經(jīng)釋放的最主要的血管活性肽類 物質，是迄今已知最強的血管舒張肽，在偏頭痛的發(fā)病機 制中起著關鍵性作用。

綜上所述，不同濃香型白酒對小鼠宿醉頭痛相關效應 指標的影響存在差異，其中酒樣①較酒樣②能誘導產(chǎn)生更 高的SP、MEK含量水平，結合白酒理化成分分析，提示可 能與酒樣中較高的總酸、乙醛、乙縮醛等微量成分有關。