旋轉搖床對癌細胞凋亡作用的研究！??！

     乳 腺癌細胞凋亡水平上升時，包括 miR?145?5p 在內(nèi) 的多種 miRNA 水平上升 。miR?145?5p 與 ATF1 和乳腺癌細胞凋亡之間的 聯(lián)系，本研究旨在探討 miR?145?5p 靶向調(diào)控 ATF1 對乳腺癌細胞 MCF7 凋亡的影響。胎 牛 血 清（Thermo 公 司）、1640 培養(yǎng)基（GE 公司）、pmiR?RB?Report 質粒 （上海欽誠）、HiPerFect Transfection Reagent（德國 凱杰），P21、BAX、ATF1、BCL?2、Caspase9、Tubulin 抗體（英國 ABCAM），蛋白裂解液（碧云天）、山羊 抗大鼠 IgG 和山羊抗兔 IgG（H+L）（艾美捷）、PBS （上海生工）、蛋白酶抑制劑（上海睿鉑賽）、青鏈霉 素 混 合 液（上 海 索 寶）、ClonExpress II One Step Cloning 試劑盒（南京諾唯贊），Luciferase 熒光素酶 報告檢測試劑盒（武漢艾美捷），U6 和 miR?145?5p 熒光定量 PCR 引物、qPCR 和 miRNA 反轉錄試劑 盒（廣 州 復 能 基 因），miRNA 快 速 提 取 試 劑 盒 （HaiGene）、Western blot 裝置（美國伯樂公司），細 胞培養(yǎng)箱、生物安全柜購和酶標儀（美國 Thermo）、 微量加樣器（法國 Gilson）、冷凍離心機（德國 Ep? pendorf）、旋轉搖床（江蘇海門市其林貝爾）、脫色 搖床（大龍興創(chuàng)）、熒光定量 PCR 儀（美國 ABI）； miR?145?5p 序列來自 miRBase，miR?145?5p 模似物 和 miR?145?5p 抑制物由上海生工生物工程股份有 限公司合成。

    miRNA 是 內(nèi) 源 性 22nt 非 編 碼 RNA，其 靶 向 mRNA 用于切割或翻譯抑制。許多 miRNA 調(diào)節(jié)程 序性細胞死亡，包括細胞凋亡、自噬和壞死性凋 亡。一系列研究表明，miR?145?5p 是幾種腫瘤 的腫瘤抑制因子，如結腸癌 、乳腺癌、和前 列腺癌 ，而 miR?145?5p 抑制乳腺癌的機制尚未 報道。ATF1 是構成基本亮氨酸拉鏈轉錄因子的 亞家族的一員，介導各種細胞外信號的轉錄反應， 它參與細胞活力和細胞轉化 。