黃原膠基因工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化（其林貝爾QL-9

1 材料與方法 

1． 1 材料 

1． 1． 1 菌株和試劑

黃原膠高產(chǎn)菌株 XccYH1 由本實驗室 通過基因工程方法獲得?？股乩Ｆ劫徸?Sigma 公司。 

1． 1． 2 儀器

PB － 10 pH 計( SAＲTOＲIUS AG) ; MP2002 電 子天平( 上海恒平科學(xué)儀器有限公司) ; DHP － 9052 型電熱恒 溫培養(yǎng)箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; SW － CJ － 2FD 潔 凈工作臺( 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司) ; ZHWY200B 恒溫培 養(yǎng)振蕩器( 上海智城分析儀器制造有限公司) ; LS － B50L －Ⅱ 立式壓力蒸汽滅菌鍋( 江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司) ; QL － 902 漩渦混合儀( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; DHG － 9240 鼓風(fēng)干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) 。 

1． 2 方法 

1． 2． 1 野油菜黃單胞菌胞外多糖的檢測

將菌株 XccYH1 接種于 NYG 液體培養(yǎng)基( 5 g /L 蛋白胨，3 g /L 酵母粉， 20 g /L甘油) 中，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 24 h 后，調(diào)整菌 體濃度至 OD600約為 1． 0，并按 1% 的比例接種至含 4% 碳源 的 NYG 中( 含相應(yīng)抗生素) ，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 5 d 后，加入 4 倍體積的無水乙醇沉淀胞外多糖，邊注入邊攪拌， 然后將絮狀沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥，所得即為黃 原膠。以黃原膠重量作為衡量發(fā)酵效果的標(biāo)準(zhǔn)。 

1． 2． 2 碳源對黃原膠發(fā)酵的影響

以淀粉、葡萄糖、麥芽糖 和蔗糖作為培養(yǎng)基碳源，考察碳源對黃原膠發(fā)酵的影響。在 NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麥芽糖和 4% 蔗糖作 為培養(yǎng)基，按照“1． 2． 1”方法進(jìn)行黃原膠發(fā)酵，每組發(fā)酵設(shè)計平行做 3 個。

2 結(jié)果與分析

為進(jìn)一步提高基因工 程菌 XccYH1 的黃原膠產(chǎn)量，首先探索不同碳源對黃原膠產(chǎn) 量的影響。以淀粉、葡萄糖和麥芽糖為碳源時， 黃原膠產(chǎn)量無顯著性差異，而以蔗糖為碳源時，所產(chǎn)的黃原 膠產(chǎn)量最高，后續(xù)試驗中以蔗糖作為碳源測定黃原膠產(chǎn)量。在低濃度碳源( 2% ～ 6% ) 時，黃原膠產(chǎn)量隨著濃度的增 加而顯著增加，當(dāng)添加 6% 蔗糖時黃原膠 產(chǎn) 量 最 高，達(dá) 20． 3 g /L。但繼續(xù)提高碳源濃度到 8% ，顯著抑制菌體生長，也沒有檢測到黃原膠。因此，碳源濃度為 6% 時，黃原膠產(chǎn)量 最高?；蚬こ叹? 穩(wěn)定性往往是能否進(jìn)入工業(yè)化應(yīng)用的重要評價指標(biāo)，在非抗 生素壓力條件下穩(wěn)定性好的菌種將具有更好的應(yīng)用前景，該 研究將 XccYH1 菌株在無抗性的培養(yǎng)基上連續(xù)劃線傳 10 代 后，菌落形態(tài)沒有差異，進(jìn)一步考察了傳不同代數(shù)時黃原膠 的產(chǎn)量。

3 結(jié)論與討論 

野油菜黃單胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原 菌，在全球范圍內(nèi)引起植物病害，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。Xcc 在植物侵染過程中產(chǎn)生眾多的致病因子，包括蛋白酶、纖維 素酶、胞外多糖等，因此 Xcc 也是研究細(xì)菌與植物互作的模式菌種。另一方面，Xcc 產(chǎn)生的胞外多糖( 黃原膠) 又具有 重要的工業(yè)價值，在食品、藥品、化妝品等諸多領(lǐng)域中有廣泛 的應(yīng)用。

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