LC-MS/MS測(cè)定人血清中奧卡西平(QL-861使用)

奧卡西平(oxcarbazepine，OXC)是一種抗癲癇 藥和抗驚厥藥，適用于治療原發(fā)性全面性強(qiáng)直-陣 攣發(fā)作和部分性發(fā)作，伴或不伴繼發(fā)性全面發(fā)作，此外還可用于治療三叉神經(jīng)痛等。OXC 在服用后， 迅速且?guī)缀跬耆桓闻K中芳香酮還原酶降解為藥 理活性 代謝產(chǎn)物 10-羥基卡馬 西平 (metabolite10-hydroxycarbamazepine，MHD)，OXC 的血清半 衰 期 為 1.3~2.3 h ， MHD 的 血 清 半 衰 期 為 (9.3±1.8)h。

1 儀器與試劑 

ACQUITY I-S 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(美 國(guó) Waters 公司)；MS-105DU 型電子天平(梅特勒托 利多儀器上海分部)；MulLifuge.XIR 高速冷凍離心 機(jī)(德國(guó) Thermo 公司)；其林貝爾QL-861 型渦旋儀(海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司)。 乙腈、甲醇(色譜純，德國(guó)默克公司)；甲酸(色 譜純，ANAOUR CHEMICALS SUPPLY)；藥品： OXC( 中國(guó)食品藥品檢定研究院 ， 批 號(hào) ： 100657-201102；含量：99.8%)；MHD(大連美侖生 物技術(shù)有限公司，批號(hào)：29331-92-R；含量：98%)； 內(nèi)標(biāo)：卡博替尼(Ark Pharm 公司，批號(hào)：RSC181； 含量：99.8%)?？瞻籽逵蓽刂葆t(yī)科大學(xué)附屬第一 醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。 

2 方法與結(jié)果 

2.1 色譜條件與質(zhì)譜條件

色 譜 條 件 ： 色 譜 柱 為 Waters BEH C18(2.1 mm×150 mm，1.7 μm)，柱溫 40 ℃，流動(dòng) 相為 0.1%甲酸(A)-乙腈(B)。梯度洗脫，0~1.0 min， 60%A；1.0~1.5 min，60%→30%A；1.5~ 2.0 min， 30%A；2.0~2.5 min，30%→60%A；2.5~ 3.0 min， 60%A。流速為 0.3 mL·min?1，進(jìn)樣體積 1 μL。質(zhì) 譜條件：電噴霧離子化正離子 MRM 檢測(cè)模式。 OXC及MHD的檢測(cè)離子對(duì)分別為OXC[M-H+ ]m/z253.2→180.1，MHD[M-H+ ]m/z 255.3→194.2。 

2.2 溶液的配制 

精密稱(chēng)取 OXC 10.00 mg 置于 10 mL 量瓶，用 甲醇溶解配成 1 mg·mL?1 的 OXC 溶液，同理分別 配制 1 mg·mL?1 的 MHD 溶液、卡博替尼溶液。將 OXC、MHD 溶液混合配制成同時(shí)含有 20 μg·mL?1 OXC 和 800 μg·mL?1 MHD 的對(duì)照品溶液，卡博替 尼溶液稀釋成 200 ng·mL?1 作為內(nèi)標(biāo)。上述溶液均 放置?80 ℃冰箱保存。對(duì)照品溶液分別稀釋成 6 個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液，使得 OXC 濃度分別為 0.2，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μg·mL?1，MHD 濃 度分別為 8，40，80，200，400，800 μg·mL?1。 

2.3 血清樣本處理 

取 血 清 樣 本 100 μL， 加 入 10 μL 內(nèi) 標(biāo) (200 ng·mL?1 的卡博替尼)，渦旋混勻 30 s，再加入 300 μL 乙腈沉淀蛋白，渦旋混勻 30 s，離心 (13 000 r·min?1 )10 min，取上清液加至進(jìn)樣瓶中， 1 μL 進(jìn)樣分析。 

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定與定量下限 

取 7 個(gè) EP 管，1 個(gè)空白血清對(duì)照，其中 6 個(gè) 分別加入 5 μL 6 個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液，分別 加入 95 μL 空白血清，使得 OXC 的血藥濃度為 0.01，0.05，0.10，0.25，0.50，1.00 μg·mL?1，MHD 的血藥濃度為 0.4，2.0，4.0，10.0，20.0， 40.0 μg·mL?1，渦旋 30 s，按照“2.3”項(xiàng)下方法操 作后進(jìn)樣分析，分別以 OXC、MHD 與內(nèi)標(biāo)的峰面 積比為縱坐標(biāo)(Y)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線(xiàn) 性回歸得 OXC、MHD 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程分別為 Y=0.152 444X?0.497 848，r 2=0.995 8；Y= 0.013 467 9X+18.216，r 2=0.996 2，表明 OXC、MHD 血藥濃度分別在 0.01~1 μg·mL?1，0.4~40 μg·mL?1 內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，定量下限分別為 0.01 ， 0.4 μg·mL?1。 2.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別將空白血清，添加 OXC、MHD 對(duì)照品溶 液的空白血清，服用 OXC 的患者血清按照“2.3” 項(xiàng)下血清樣本處理方法進(jìn)行操作，記錄色譜圖， 結(jié)果見(jiàn)圖 1。結(jié)果顯示，OXC、MHD 在本實(shí)驗(yàn)色 譜條件下保留時(shí)間分別約為 1.25，0.98 min，與內(nèi) 標(biāo)卡博替尼完全分離，測(cè)定結(jié)果不受血清內(nèi)源性 物質(zhì)干擾，說(shuō)明本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，適用于測(cè)定 OXC、MHD 的血藥濃度。

3 討論 

近年來(lái)，質(zhì)譜技術(shù)除了廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)、 環(huán)境監(jiān)測(cè)、生命科學(xué)研究，在臨床檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域 中的作用也越來(lái)越重要，如維生素 D 和激素的檢 測(cè)、新生兒遺傳代謝疾病篩查、藥動(dòng)學(xué)研究、治 療藥物濃度監(jiān)測(cè)等。目前，臨床上應(yīng)用最先進(jìn)、 最廣泛的質(zhì)譜技術(shù)是 LC-MS/MS。該技術(shù)將高效 分離和高靈敏度的檢測(cè)合二為一，分析的目標(biāo)化 合物范圍廣(極性和非極性)，快速方便，大大減少 假陽(yáng)性幾率，有效降低經(jīng)濟(jì)成本。

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