微量振蕩器使用于蘆薈凝膠的曬后修復功效分析

蘆薈是一種多年生百合科蘆薈屬肉質的草本 植物，最早起源于南非，作為天然藥用植物，蘆薈 已有幾千年的藥用歷史，在我國古代醫(yī)書《神農本 草經(jīng)》、《本草綱目》、《本草拾遺》中均記載著蘆薈 特殊的藥用功效，在《辭海》中也有相關記載： “蘆薈，主產(chǎn)于熱帶非洲，中國云南元江有野生”。 在日本，人們把蘆薈稱之為“不需要大夫”（醫(yī)者いらず），被譽為世界標準藥典的《英國藥典》對 其也有入藥記載 。

庫拉索蘆薈凝膠凍干粉（批號 20170829，云南萬綠生物股份有限公司）、甘草酸二鉀、透明質 酸鈉（Bomei，相對分子質量在 0.8 × 106 ~ 2.0 × 106 ）、透明質酸酶（上海源葉生物科技有限公司， 300 ~ 500 U/mg）、醋酸鈉（NaC2H3O3•3H2O）、角質 形成細胞培養(yǎng)液（第四軍醫(yī)大學組織工程中心）、 PBS（博士德）、MTT（Sigma）、 DMSO（Sigma）、 Human IL - 1α ELISA KIT（博士德）、Human IL - 8 ELISA KIT（Abcam）。冰醋酸、氯化鈉、十六烷基 三甲基溴化銨（CTAB），均為國產(chǎn)分析純。

紫外 - 可見分光光度計（Thermo）、CO2 培養(yǎng) 箱（Thermo）、超凈工作臺（蘇凈安泰）、倒置顯微 鏡（Olympus）、微量振蕩器（其林貝爾）、酶標儀 （BioTek）、恒溫箱（泰斯特）。

1.1.3 測試系統(tǒng)
 

細胞實驗所用細胞為角質形成細胞，由廣東 博溪生物科技有限公司通過細胞原代、傳代培養(yǎng)獲得。

透明質酸酶能將大分子的透明質酸水解成低 分子化合物，未水解的透明質酸會與十六烷基三甲 基溴化銨（CTAB）形成不溶物，而水解后的低分子 化合物不會。通過測定 405 nm 處的濁度值，可以 反映透明質酸酶的活性。 實驗設置：將庫拉索蘆薈凝膠粉按照 16.5、 33、82.5 和 165 mg/mL 的質量濃度進行分組，每 個實驗分組按表 1 進行操作。

1.2.2 基于角質形成細胞的 MTT 檢測實驗

實驗方案：庫拉索蘆薈凝膠粉樣品檢測設置 8 個濃度梯度，每個濃度梯度下設置 3 個重復孔，同 時，實驗設置溶劑對照孔、調零孔（角質形成細胞 培養(yǎng)液）和陽性對照孔（PC， 40 mg/mL DMSO）。 通過 MTT 細胞活性檢測方法，篩選下一步實驗中 細胞給藥的最大安全濃度。

數(shù)據(jù)經(jīng)過 SPSS 12.0 統(tǒng)計軟件做多組間單因 素方差分析，以 P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義，由 于測試平臺特性，數(shù)據(jù)存在波動性，SD 值控制在 10% 以內。通過測試，庫拉索蘆薈凝膠粉在 16.5 ~ 165 mg/mL 范圍內對透明質酸酶抑制率分別為 13.10% ~ 82.14%（P<0.05），低濃度下比對照品甘 草酸二鉀效果稍弱，但在 165 mg/mL 的高濃度下， 可以達到與 0.5 mg/mL 甘草酸二鉀接近的效果，本 次測試的結果表明，庫拉索蘆薈凝膠粉測試樣具有 較好的透明質酸酶活性抑制作用，且在一定濃度范 圍內，抑制率與添加量呈正相關，與 0.5 mg/mL 甘 草酸二鉀的抑制趨勢和效果接近。根據(jù) MTT 實驗結果可以看出：與溶劑對照相 比，當蘆薈凝膠粉濃度為 250 mg/L 時，細胞的相 對活力值為 91.40%，且無細胞毒性（注：選取細胞 相對活力值大于 90% 的轉折點濃度作為最大安全 給藥濃度）。根據(jù)形態(tài)學結果可以看出：樣品庫拉索蘆薈凝 膠粉質量濃度為 250 mg/L 時，細胞邊緣輪廓清晰， 形態(tài)規(guī)則，胞內無明顯顆粒物，與溶劑對照組細胞 狀態(tài)無明顯差異。故根據(jù) MTT 結果和形態(tài)學結 果，最終確定樣品庫拉索蘆薈凝膠粉在角質形成細 胞上的最大安全給藥濃度為 250 mg/L。

蘆薈作為一種具有漫長種植史的草本植物，在 很多地方被當?shù)厝擞糜诒窈托迯头矫娴乃幉模?對于蘆薈含有的成分修復作用的研究也很多， 但大多是基于蘆薈大黃素等蒽醌類物質的功效研 究，對蘆薈凝膠的修復功效研究還較少。 透明質酸酶是一類在動物組織和微生物中廣 泛存在的酶，它通過斷開透明質酸（HA）糖鏈中的 N - 乙酰氨基葡糖和 D - 葡糖醛酸之間的糖苷鍵， 將其解聚和水解成小分子的 HA 或寡糖，HA 的代 謝對于皮膚的保濕、微觀炎癥和損傷的修復都有著 重要的作用，透明質酸酶調節(jié) HA 代謝的作用在生 理活動中也越來越受到重視，活性成分對透明 質酸酶的抑制，與其保濕、曬后修復等功效都有著 重要的關聯(lián)。 紫外線損傷，又稱光老化，是由于皮膚在紫外線，特別是 UVB 的照射下，局部出現(xiàn)的紅斑、角質 層破壞等微觀損傷，也是皮膚眾多微觀炎癥和損傷 中較為常見的微觀損傷。